LC-MS – Vérification

Vérification fonctionnement LC/MS :

Préférer l’utilisation de pipette / vial à usage unique (la vaisselle en verre introduit des contaminations dues à l’eau de rinçage).
Pré-rincer les vials avec la phase mobile.

Ionisation négative :
Etalon : chloramphenicol.
Préparer un échantillon à 500fg/µl de chloramphénicol avec un solvant eau/méthanol (70/30).
Injection de 2µl pour avoir 1 fg de chloramphénicol en entrée d’analyseur de masse.

Ionisation positive :
Etalon : réserpine.
Préparer un échantillon à 500fg/µl de réserpine avec un solvant acétonitrile/eau (70/30).
Injection de 2µl pour avoir 1 fg de réserpine en entrée d’analyseur de masse.

Préparer 3 vials : 1 vial sans liquide ni bouchon, 1 vial avec solvant échantillon de dilution, 1 vial avec la solution de vérification.
Vial 1 : air, vial 2 : eau/méthanol (70/30) ou acétonitrile/eau (70/30) et vial 3 : chloramphénicol 500fg/µl ou réserpine 500fg/µl.

Préparation séquence d’acquisition pour la vérification :
(paramètre d’acquisition de la séquence MRM (séquence Agilent par défaut))

Ligne de base :
Effectuer 1 injection avec le blanc (vial 2),

Séquence d’injection pour la vérification de la masse :
Effectuer 1 injection avec l’air (vial 1),
Effectuer 5 injections avec le blanc (vial 2),
Effectuer 5 injections avec l’étalon (vial 3).

Utiliser le programme de masse pour calculer automatiquement le rapport signal/bruit pour les 10 injections effectuées (définir le bruit pour les injections d’étalon entre 0,1 et 0,350 min, en faisant attention à ne pas prendre en compte le pic étalon).

Vérifier que le rapport Signal/Bruit est supérieur à la limite (voir tableau ci-après) :

Modèle Mode G1948B Electrospray Agilent Jet Stream
6495 Positive/Negative 75,000:1 (Auto-RMS,1pg)
6490 Positive/Negative 25,000:1 (Auto-RMS,1pg)
6470 Positive 37,500:1 (Auto-RMS,1pg)
Negative 15,000:1 (Auto-RMS,1pg)
6460 Positive  5,000:1 (Auto-RMS,1 pg) 15,000:1 (Auto-RMS,1 pg)
Negative 1,500:1 (Auto-RMS,1 pg) 5,000:1 (Auto-RMS,1 pg)
6430 Positive 300:1 (1×RMS, 1 pg)
6420 Positive 3,000:1 (Auto-RMS,1 pg)
Negative 1,000:1 (Auto-RMS,1 pg)
6410B with G2573A Positive 300:1 (1×RMS, 1 pg)
6410B Positive 150:1 (1×RMS, 1 pg)
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